1482年达·芬奇来到米兰 ，应圣弗朗切斯科 教堂的邀请绘制祭坛画《岩间圣母》。这幅现藏于巴黎的作品，虽仍然是传统题材，但人物形象的塑造和岩窟幽深的刻 画及山岩间花草*真的描绘，证明他使用的烟雾状笔法已使 其在传真写实和艺术加工方面达到了新的水平。
尤其,这幅画,达芬奇在很久以后,又创作了一幅,虽布局并无多大变换,但人物的动作等方面,有了一定的变化。应该算是对第一幅>的更正。现藏于英国。《最后的晚餐》是他在这一时期创作中最负盛名之作。这幅表现基督被 捕前和门徒最后会餐诀别场面的湿壁画，绘制在米兰圣玛丽 亚·德拉格拉齐耶修道院饭厅。
巧妙的构图和独具匠心的经 营布局，使画面上的厅堂与生活中的饭厅建筑结构紧密联结 在一起，使观者感觉画中的情景似乎就发生在眼前。在人物布局上，一反平列于饭桌的形式，将基督独立于画面中央，其他门徒通过各自不同的手势、表情，分别表现出惊恐、愤怒、怀疑、剖白和慌张的情绪。
这种典型性格的描绘，突出了绘画的主题，它与构图的统一效果互为补充，堪称美术史上最完美的典范之作。1500年达·芬奇回到佛罗伦萨，随着共和制度的恢复，文化气氛一度活跃，画坛上也先后出现了米开朗琪罗、拉斐尔等杰出人物。他向市民展出的一幅经过精心构思的《圣母子与圣安娜》素描草图，立即引起轰动，其构图原理和画法对艺术界有极大影响，米开朗琪罗和拉斐 尔等人也从中得到启发。
1503年他一面着手为市政厅大会议 厅绘制壁画（因再次去米兰而始终未完成），一面创作《蒙娜丽莎》和《圣母子与圣安娜》。这是两幅他极为珍爱的作品，始终带在身边，晚年移居法国也不离左右，最后遗存巴黎。
准确的来说最著名的是蒙娜丽莎。
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